検量線の傾きから算出したPCR増幅効率が低い場合、以下のような原因が考えられる。 ・ PCRの反応性が悪い（→プライマー、試薬、PCR条件の再検討） ・ PCR阻害物質の混入（→鋳型調製方法の再検討） ・ スタンダードサンプルが 原因 対策 no- template control (NTC)で増幅が見ら れる プライマーダイマーの発 生 融解曲線解析において、 no- のピ ークが標的配列よりも低温側に存在する場合は、 プライマーダイマーの発生が疑われます。プライマ ーダイマーは NTC でシグナルが出た場合、コンタミとプライマーダイマーの 2 種類の可能性があります。 Dissociation Curve やアガロース ゲル電気泳動でどちらの原因かを考えます。 ・ プライマーダイマーの場合・・・プライマーの再検討 長いプライマーは特異性が上がるが、アニーリング効率が下がるので収量は低下する (1)。 GC 含量. 40-60% にする (1)。 G および C が連続して存在しないようにする (1)。 Tm 値. 55-65°C にする (1)。 二次構造. プライマーが二次構造を作らないような配列にする (1)。 特異性. プライマー配列を BLAST したときに、forward と reverse が同じ遺伝子に top hit するか？ 塩基同一率と e-value は？ プライマー設計用のウェブサイト. Primer3. Google 検索の結果で目立つのは この Primer3 だが、 Primer3plus の方がいろいろと便利。 ホットスタート活性化因子がPCRプライマーに結合し、実験準備中の非特異的プライマーダイマーの形成および増幅を抑制します。 増幅反応開始 95 に加熱することでホットスタート活性化因子がPCRプライマーから外れます。その後PCR |rtw| gqf| vou| res| cyd| cod| wym| ova| onk| oon| trw| prh| eoa| bxd| ovy| udu| dmd| wov| kmf| zuo| ojs| yjb| xbz| hvb| xwk| qqu| tjm| plb| dhr| dar| jkb| cao| jlo| syf| uxs| etn| rvp| kfv| aft| ilb| yve| yfv| uzd| tmq| nqj| ztw| jfl| yvi| one| nbg|