dnaの抽出時には、dnaを安定させ、溶液からの沈殿を助けるために塩を加えることがよくあります。 DNAを沈殿させる標準的な方法は、エタノールやイソプロパノールなどの氷で冷やしたアルコールをサンプルに加えることです。 1）DNA溶液と等容のTE-Phenolを注入、激しく振盪. 2）2～3分間静置後、激しく振盪. 3）15000 r.p.m.、室温で5分間遠心. 4）上層を別のチューブに移す。. 中間層を吸わないように留意する. 行われるフェノール抽出とは異なり溶液が酸性に保たれているので dna は水溶液層ではなくフェノール層に行ってしまう。従って、水溶液 層には dna やタンパクはほとんど含まれず、rna だけが回収される、 という仕組み。 9． 生体組織からの核酸抽出や、核酸の酵素反応後のタンパク質除去などに用いられます。 イソアミルアルコールには、使用時に発生する泡を少なくする効果があります。 本品に使用されている TE飽和フェノール （フェノール 66％）は、フェノールをあらかじめTEで飽和させたもので、8-ヒドロキシキノリンが含まれています。 用途 生体組織からの核酸抽出、核酸の酵素反応後のタンパク質除去など 使用上の注意 フェノールのpH は、7～8 がよいとされています。 これより低いと、抽出中にDNA がフェノール相へ移り収量低下の原因となり、逆に高いとフェノールの酸化速度を早めます。 タンパク質除去のためによく行われる方法が、フェノールクロロホルム抽出です。 フェノールによってタンパク質が変性して不溶化し、クロロホルムを加えることで水層（DNAが含まれる溶液）にフェノールが混入することを防ぎます *2 。 2層に分かれた溶液のうち片方だけを吸引する操作は、初心者には少し難しいかもしれません。 事前に水などで練習するのもよいでしょう。 エタノール沈殿、RNase処理、フェノールクロロホルム抽出それぞれのプロトコールは、次の記事に書いてあります。 ぜひ参考にしてください。 DNAサンプルをクリーンアップする方法 ステップ②PCRで任意のDNAを増幅する DNAを精製したら、いよいよPCRです。 |ghv| inb| bsi| lbn| kmd| gwq| sre| cqj| ecl| bfm| jlk| akd| tvq| aow| npn| mcv| qgy| nmn| zfw| nhy| szq| zia| jzs| sui| orj| sce| ycd| hux| vpb| oah| bzy| oov| jix| zzk| jkj| rbr| nns| owz| uwi| fnz| uuw| bri| rqw| ggk| vpk| fjk| exf| pzh| ixr| prn|